无菌拭子用于对洁净室的表面进行采样。Satyada 和 Sandle 在 2017 年进行的一项研究调查了棉签释放采样微生物能力的优化问题。他们对稀释剂、涡旋混合时间和保持时间等因素的研究结果为提高棉签取样方法的稳健性提供了指导。
表面采样前是否应预湿无菌拭子？
作为环境监测计划的一部分，无菌拭子通常用于在洁净室和受控环境中进行表面采样。但这些棉签是否应该在采样前预湿，以帮助从表面回收微生物？Satyada 和 Sandle 最近的一项研究调查了预消毒棉签在不同涡流混合时间后释放采样微生物的能力。他们的研究结果为预湿棉签和最佳涡旋时间提供了一些指导。
哪些因素会影响无菌拭子的微生物回收率？
拭子的设计因素（如尖端材料和编织）各不相同，这些因素会影响拭子从表面拾取和释放微生物的能力。普通拭子尖端通常只能回收表面微生物的 5-15%。然而，拭子尖端由垂直于轴的编织纤维制成的植绒拭子可回收表面微生物的 40-60%。拭子的尖端与表面相互作用，从而捕获微生物。预湿可促进物理分离和水力清除，从而改善拾取效果。但随后需要将微生物有效地释放到溶液中进行分析。拭子在稀释液中的涡旋混合和均质化是去除生物进行检测的关键。样品在处理前的放置时间也会影响微生物的存活率和回收率。
拭子释放研究是如何进行的？
Satyada 和 Sandle 评估了六种代表不同形态和细胞壁的 ATCC 菌株以及一种分离出的人体皮肤共生菌从棉签到生理盐水稀释液中的释放情况。在进行膜过滤定量之前，将拭子涡旋混合 15、30、45 或 60 秒。回收率与直接加入稀释液的阳性对照进行比较。拭子仅在涡旋 15 秒后就释放出 50%以上的微生物，时间越长，回收率越低。15 秒的最佳时间适用于所有测试的微生物菌株。
拭子释放研究的结果是什么？
主要发现是，15 秒的涡旋混合能释放出足够比例（大于 50%）的拭子尖端拾取的微生物。虽然回收率达到了 80%-100%，但延长涡旋时间并不能显著提高拾取率。作者得出结论，15 秒钟的涡旋时间足以让植棉拭子在表面采样时获得有用的微生物回收率。这种使用最短有效涡旋时间的精益原则有助于简化程序。研究还表明，建议将拭子释放效率评估作为环境监测方法验证的一部分。
表面采样前是否应预湿拭子？
预湿拭子吸头被认为是有助于有效去除表面微生物的最佳做法。水润的拭子头能更好地与表面相互作用，拾取微生物。与干燥的拭子吸头相比，液体还有助于物理分离和清除。因此，建议在使用拭子进行表面取样时进行预湿。不过，采样前应去除过多水分，以免稀释样本。该研究使用生理盐水预湿拭子作为优化的基线方法。
拭子设计和稀释剂会影响微生物释放吗？
该研究只考察了一种拭子类型，但设计确实会影响拾取和释放。在微生物回收方面，植绒拭子优于普通棉签头。该研究还使用了一种稀释剂，即生理盐水。其他稀释剂可能会产生不同的生物释放动力学和回收率。常用的稀释剂有磷酸盐缓冲盐水或 Dey-Engley 肉汤，或 Triton X-100 等表面活性剂。稀释剂可以帮助微生物在涡旋过程中脱离拭子纤维。稀释剂的化学效果值得进一步研究。
我们应该用拭子还是接触板对表面进行采样？
与拭子相比，接触板通常能更好地回收微生物。它们能对一个确定的区域进行采样，而且涉及的程序步骤较少。不过，拭子对于平板无法使用的不规则设备表面采样仍然有用。使用平板对关键的平整表面进行采样和使用拭子对不规则区域进行采样相结合的方法是最佳选择。但对于拭子取样来说，了解取样方法的效率非常重要。应评估涡旋混合时间和稀释剂等因素，以优化采集和回收。
样本在处理前应放置多长时间？
该研究立即处理了加标拭子。但是，采样和检测之间的保存时间和温度会影响微生物的存活率和回收率。例如，一项研究发现，在室温下保存超过 4 小时的样本回收率明显较低。为保持样本的完整性，建议进行有控制的保存和快速处理。保温时间验证可作为拭子释放评估的补充。
还有哪些因素会影响拭子采样方法的稳定性？
除了接触时间、压力和采样面积外，采样操作人员的技能和技术等因素也会影响拭子采样结果。表面材料和粗糙度等环境因素也会产生影响。本研究中展示的高效涡流混合有助于提高方法的稳定性。对采样数据进行持续的趋势分析，可以发现任何新出现的不一致之处。归根结底，拭子方法与接触板相比具有固有的可变性。但通过优化和标准化，它们仍然是一种有价值的表面监测工具。
参考文献
Sandle, Tim & Satyada, Ravikrishna. (2017). Releasing capacity of pre-sterile cotton swabs for discharging sampled microorganisms. European Journal of Parenteral and Pharmaceutical Sciences. 21. 121-128.
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