什么是口腔拭子，如何采集？
口腔拭子是一种从人体口腔采集样本的棉签，在进行口腔拭子检查时，医疗服务提供者会用拭子轻轻擦拭脸颊内侧，以收集颊上皮细胞。这是一种相对非侵入性的 DNA 样本采集方法，可用于基因检测或法医分析。
口腔拭子采集套装通常包含海绵拭子或植绒拭子、保存液管、手套、标签和说明书。用拭子擦拭脸颊内侧并摩擦 5-10 秒钟以收集细胞，注意不要让拭子尖端接触到脸颊内侧以外的任何表面。然后将拭子放入收集管中，晾干并贴上标签。口腔拭子采集可由医疗服务提供者完成，也可由个人按照简单的说明自行完成。这种方法快速、无痛，而且能采集到高质量的 DNA。
口腔拭子可用于哪些类型的样本和下游分析？
口腔拭子通常用于临床、法医和研究环境中的 DNA 检测和分析。在临床中，口腔拭子可为新生儿筛查、亲子鉴定、肿瘤风险测试和药物基因测试等基因测试提供 DNA。口腔拭子易于从任何年龄的成人和儿童身上采集。在法医学中，口腔拭子中的触摸 DNA 与从犯罪现场收集的 DNA 匹配后，可以确定或排除嫌疑人。口腔拭子还广泛用于涉及遗传学、表观遗传学、基因表达和蛋白质组学的生物医学研究。
口腔拭子采集的高质量 DNA 与多种下游应用兼容，包括 PCR、芯片、测序、基因分型和质谱分析。与血液样本相比，口腔拭子提供的上皮细胞 DNA 更纯净，白细胞污染更少。从口腔拭子中分离出的完整、高分子量 DNA 在长程 PCR 等技术中表现出色。
使用口腔拭子的优势是什么？
口腔拭子有许多优点，是采集 DNA 样本的首选方法：
1. 无创无痛。拭取脸颊内侧既简单又舒适。
2. 方便简单。可根据基本说明自行采集样本。
3. 老少皆宜。口腔拭子可用于成人、儿童、婴儿和老人。
4. 纯净的 DNA。与血液相比，口腔拭子细胞产生的 DNA 质量高，细胞异质性小。
5. 储存稳定。口腔拭子中的 DNA 在室温下保持稳定，便于运输和储存。
6. DNA 产量高。用力拭擦可最大限度地回收上皮细胞和 DNA 数量。
7. PCR 兼容性。完整的高分子量 DNA 在 PCR 和测序中表现非常出色。
8. 成本效益高。与抽血或活检相比，口腔拭子采集成本更低。
口腔拭子的非侵入性、便利性和出色的 DNA 产量使其成为大多数 DNA 采集应用的首选方法。
口腔拭子与其他 DNA 来源相比有何优势？
虽然口腔拭子被广泛使用，但研究人员往往不得不在口腔拭子、血液、唾液或其他 DNA 来源之间做出选择。区分口腔拭子的关键因素包括
1. 细胞成分： 与血液不同，口腔拭子提供的是纯上皮细胞 DNA，白细胞污染少。唾液中也含有颊上皮细胞和白细胞的混合物。
2. DNA 质量：来自口腔拭子的高分子量 DNA 在 PCR、测序和其他下游应用中表现良好。而其他来源的 DNA 可能会比较破碎。
3. 样本采集： 口腔拭子需要在脸颊内进行非侵入性擦拭。血液需要静脉穿刺，唾液则需要吐入试管。
4. 样本稳定性： 与唾液不同，口腔拭子中的 DNA 在室温下运输和储存时保持稳定。如果保存不当，血液样本的 DNA 也会随着时间的推移而降解。
5. 受试者舒适度： 抽血会让受试者感到不舒服。口腔拭子和唾液采集则相对舒适。
在大多数应用中，口腔拭子具有上皮细胞纯度高、DNA 质量好、稳定性强、受试者舒适等优点，是采集 DNA 样本的首选，而不是血液或唾液。不过，在涉及蛋白质组学或代谢物的研究中，唾液可能是首选。
哪些因素会影响口腔拭子的 DNA 产量和质量？
虽然口腔拭子能提供高质量的 DNA，但必须采取一些预防措施来最大限度地提高 DNA 的产量和纯度：
1. 拭取技术： 用力拭擦可最大限度地收集细胞和提高 DNA 产量。轻拭可回收较少的细胞。
2. 拭子类型： 与传统棉签相比，植绒棉签或泡沫棉签能收集和释放更多细胞。
3. 口腔健康： 牙龈炎引起的炎症会增加口腔样本中的白细胞污染。
4. 采集前进食/饮水： 食物残渣会污染拭子样本，因此受试者在采集前不应进食或饮水。
5. 吸烟： 吸烟产生的化学物质会沉淀和破碎 DNA，因此应在吸烟至少 30 分钟后采集口腔样本。
6. 样本处理： 让咽拭子风干可防止进一步处理前的 DNA 降解。
遵循口腔拭子采集、处理和加工的最佳实践可确保下游分析获得最高的 DNA 纯度和产量。
使用什么技术从口腔拭子中分离 DNA？
从口腔拭子中提取和纯化 DNA 主要有两种方法：
传统的 DNA 提取试剂盒利用蛋白酶 K 消化，然后进行酒精沉淀或柱吸附来分离 DNA。这些试剂盒虽然有效，但涉及多个试管和步骤。
新型试剂盒采用新型固相化学方法，只需一步就能直接从拭子中提取 DNA，从而减少了操作时间和塑料废弃物。例如，Echoloation 提取技术只需一步就能裂解细胞并将 DNA 与基质结合，无需使用有害的混沌提取物。
在传统和新型试剂盒中，纯化的 DNA 被洗脱到与 PCR 和测序等下游应用兼容的低盐缓冲液中。选择优化的 DNA 纯化策略可最大限度地提高来自口腔拭子的 DNA 产量和质量。
药物基因检测中如何使用口腔拭子？
药物基因检测分析基因差异如何影响药物反应，从而实现个体化用药。口腔拭子为药物基因检测提供了方便的 DNA 来源。例如，HLA-B*57:01 检测使用口腔拭子 DNA 来筛查对艾滋病药物阿巴卡韦的过敏性。其他药物基因检测也使用口腔拭子 DNA 样品筛查华法林敏感性、阿片类药物代谢和卡马西平不良反应风险。口腔拭子的非侵入性采集和优良的 DNA 使其成为药物基因分析的理想选择，而不是血液。
在研究中使用口腔拭子有哪些注意事项？
口腔拭子在生物医学研究中应用广泛，但也应考虑一些因素：
- 口腔拭子样本中的细胞异质性会影响表观遗传学、基因表达和蛋白质组学研究。显微镜评估或生物信息学方法可帮助解释细胞类型差异。
- 不同受试者的 DNA 产量因拭取技术和口腔健康状况而异。标准化采集方法非常重要。
- 如果计划进行蛋白质组分析，稳定试剂有助于保存口腔样本中的 RNA 和蛋白质。
- 应优化 DNA 提取方法，最大限度地提高产量和纯度。新颖的单步 DNA 提取试剂盒可节省时间和塑料废弃物。
考虑到细胞的异质性、优化采集和稳定方法以及选择有效的 DNA 纯化策略，口腔拭子可为各种研究应用提供高质量的 DNA。
口腔拭子是一种简单、非侵入性的高质量 DNA 样品采集方法。口腔拭子出色的 DNA 纯度和产量使其成为各种遗传、表观遗传、法医、药物遗传和生物医学研究应用的理想选择。按照优化的口腔拭子采集和处理方案，研究人员和临床医生可以轻松获得 DNA 样本，用于精确的个性化分析和治疗。
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